微生物の分離と栽培

一、分離と栽培

微生物は自然界において混合状態で存在する。 所望の株を得るために、それらをそれらから分離しなければならない。 それが保存されるときそれが偶然汚染されれば、浄化されなければなりません。 微生物の分離と浄化には多くの方法がありますが、基本的な原理は似ています。 つまり、分離するサンプルをある程度希釈し、微生物の細胞 (または胞子) を可能な限り分散状態に保ち、そしてそれらは純粋な単一のコロニーに成長します。 しかし、上记の仕事は、微生物を别の灭菌培地に移すという接种のプロセスと不可分である。

微生物学的接種分類材料とツール:

一定温度インキュベーター、接種リング、ガラスロッド、ピペット、アルコールランプ、培地、大腸菌、枯草菌、黄色ブドウ球菌、酵母など。

接種の操作方法:

1.傾斜した接種 (黄色ブドウ球菌を接続)

操作する前に、75% アルコールで手を拭き、アルコールが揮発した後にアルコールランプを点火します。 ひずみチューブと左手の親指と他の4本の指の間の傾斜面を保持し、傾斜面とひずみのある側が上向きで水平な位置になるようにします。 まず、接種時に簡単に引き出すことができるように、スロープのひずみとタンポンを回転させます。 接種リングを左手で持ち (ペンを持っているように) 、最初に炎のリングエンドを滅菌してから、試験管の残りの部分に伸ばして滅菌します。 薬指、小指、右手の手のひらを使用して、胚芽チューブと、傾斜した試験管の綿プラグまたは試験管キャップを同時に引き出します。テストチューブの口をゆっくりと殺菌します (熱くなりすぎないでください)。 燃やされた接種リングをシードチューブに伸ばし、試験管の内壁またはコケのない培地の接種リングに接触し、十分に冷却させます。次に、小さなコケをそっとこすり落とし、チューブから引き出しますワクチン接種リング。 細菌を接種したリングを別の試験管にすばやく伸ばして接続します。 斜面の底から上下に密に「Z」字型を作ります。 細菌の増殖特性を観察するために、接種針を使用して培地の中央に斜めの接種のために線を引くことも可能です。 接種が完了した後、接種ループは引き抜かれ、綿のプラグが挿入されます。 ワクチン接種リングを滅菌します。 接種ループを置き、綿のプラグを締めます。

2.液体接種

傾いた媒体を液体媒体に接続します。 この方法は、バクテリアの成長特性と生化学反応の測定を観察するために使用されます。 操作方法は以前と同じですが、培養液が流出してバクテリアがつながるのを防ぐために、試験管の口を上に傾けています。接種リングとチューブの内壁を数回こすり、リング上のバクテリアを洗います。 接種後、綿のプラグを挿入し、テストチューブを手のひらで静かに軽くたたいて、バクテリアを完全に分散させます。 液体媒体から液体媒体を接種する。 菌株が液体の場合は、接種リングに加えて滅菌ピペットまたはドロッパーを使用してください。 接種するときは、炎の横にある綿のプラグを引き出し、チューブの口を炎に通し、滅菌ピペットを使用して細菌溶液を培養液に吸い込みます。そしてそれを均等に振る。

3.プレート接种

バクテリアをスコアリングしてプレートに広げます。 クロスライン接種別のクロスライン法を参照してください。 拡散と接種滅菌ピペットで細菌溶液をプレートに注入し、滅菌ガラス棒でプレートの表面を均一にコーティングします。

4.予防接種

バクテリアを固体の深部培養培地に接種します。 この方法は、嫌気性細菌に接種したり、細菌を特定する際の生理学的パフォーマンスを観察したりするために使用されます。 操作方法は上記と同じですが、使用される接種針はまっすぐでなければなりません。 接種針を培養培地の中心からチューブの底に近づくまで穿刺しますが、浸透しないでから、元の穿刺経路をゆっくりと引き出します。

二、分離操作方法:

1.希釈分離方法

分離したサンプルを連続希釈して最小に分散させ、一定量をプレートに引き込み、融解に適した寒天培地と混合します。分散したバクテリアが所定の位置に固定されて単一のコロニーを形成するようにする。 大腸菌または酵母は、細菌の懸濁液として滅菌水を使用して調製されます。 それぞれが9mlの滅菌水を含むいくつかの滅菌試験管を取ります。 準備した細菌懸濁液1mlをピペットで、9mlの滅菌水を含む最初の試験管に入れて、10倍に希釈します。これは10〜2です。 最初の試験管 (10-2) から1mlを引き出し、滅菌水を含む2番目の試験管に注入して、100倍に希釈します。これは10-2です。 それが10-5-10-6に希釈されるまで同じ方法で操作してください。 10-5-10-6で各希釈の0.2mlの細菌溶液を正確に引き、番号が付けられた空の滅菌皿に加えます。 同じ希釈を繰り返して3つの料理を作ります。 溶かして45に冷却した寒天培地を上記の各プレートに注ぎ、穏やかに回転させて、固化後、培地と細菌懸濁液を完全に混合します。それを37度または38度のインキュベーターに入れ、24〜48時間インキュベートし、観察するプレート上のコロニーの成長と分布。

2.フラットベッドのスクライブ分離方法

プレートストリーキング分離法は、プレート媒体の表面の接種リングをゾーニングで分割することにより、微生物を分離する方法です。 原理は、分離の目的を達成するために、固体媒体の表面上の微生物サンプルを「ポイントからラインまで」数回希釈することです。 プレートを注ぐ牛肉抽出物ペプトン寒天培地を溶解し、プレートを注ぎ、固まるまで水平に置きます。 アルコールランプの炎で接種リングを燃やし、冷却を待ち、黄色ブドウ球菌と大腸菌の混合接種液を取ります。 左手で寒天プレートを持ち、炎に近づきながら蓋を少し持ち上げます。 右に接種リングを持ち、皿の中に伸ばします。 プレート上の領域にスクライブラインを作成します。 接种リングは、プレートの表面から30〜40 ° である。 角度にそっと触れ、手首の力を使って表面を軽くスライドさせます。 タブレットの表面を傷つけたり、ベースに埋め込まないでください。 接種カップを燃やして、接種リングに残っている細菌液を殺します。 冷却後、接種リングを皿に伸ばします。 最初の領域で交差した線と少し接触した後、90 ° を回します。 2つのエリアは交差し続けています。 マーキング後、接種カップに接種し、冷却後、同じ方法を使用して他の領域に線を引きます。 すべての線がマークされた後、皿の底にある特別なクレヨンを使用して、ひずみ、日付、グループ、および名前を示します。 ペトリ皿全体を逆さまにして置き、一定温度のインキュベーターに入れます。 37 24〜48時間の栽培の後、取り出して観察する。 コロニースイッチの特性、サイズ、色、エッジ、表面構造、透明度などに注意してください。

三、注意事項:

1.接種室は清潔に保ち、粉砕されたフェノール石鹸液でカウンタートップと壁をこすり、乳酸またはホルムアルデヒドで定期的に燻蒸する必要があります。 それぞれの使用の前に、それはUVランプによって杀菌されるべきです。 定期的に接種室の不妊をチェックしてください。 予防接種室に入る前に、まず個人衛生を行い、作業靴、帽子、作業服、マスクを緩衝室で交換する必要があります。 作業服、作業靴、マスクは予防接種室でのみ使用できます。 他の場所に行くことは許可されておらず、定期的に交換して消毒する必要があります。 接種された試験管、三角形、ボトルには、培地と菌株の名前と日付をマークする必要があります。 接種室に移動するすべてのアイテムは、緩衝室で70% のアルコールできれいに拭く必要があります。 予防接種の前に、70% のアルコールまたはXinjieerで両手を殺菌し、手術中にアルコールランプの炎を残さないでください。タンポンはランダムに配置されません。接種ツールは、使用前と使用後に炎殺菌する必要があります。

2.インキュベーターは頻繁に掃除して消毒する必要があります。